囊泡提取试剂盒-超纯-细胞培养上清

BB-4562
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价格
  • ￥1700元
  • ￥3100元
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产品概述 product description

贝博? 细胞外囊泡（Extracellular Vesicles）提取试剂盒（细胞培养上清用，超纯）适用于从各种原代或传代培养细胞培养上清样品中提取高纯度细胞外囊泡。不需要超速离心，仅需通过简单的常规离心即可从样本中获取大量结构完整的囊泡，具有快速简单，提取效率高的特点，可节省更多的实验时间和样本。提取的囊泡可根据实验目的用于后续的多种实验，应用范围广泛。
细胞外囊泡（Extracellular Vesicles, EVs）是指从细胞膜上脱落或者由细胞分泌的双层膜结构的囊泡状小体，直径从40 nm到1000 nm不等。是细胞激活、损伤或凋亡后从细胞膜脱落或者与细胞膜融合后以外分泌的形式释放到细胞外的小囊泡。
细胞外囊泡广泛存在于细胞培养上清以及各种体液（血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁）中，携带有细胞来源相关的多种蛋白质、脂类、DNA、mRNA、miRNA等，并且能够通过生物屏障，在细胞间传递功能性核酸分子，从而发挥各种生物学功能，参与细胞间通讯、细胞迁移、血管新生和免疫调节等过程。
囊泡已经成为细胞间通讯的重要介质，参与原核生物和高等真核生物细胞之间的生物信号传递，以调节不同范围的生物过程。囊泡的病理生理作用开始在包括癌症、感染性疾病和神经变性疾病在内的疾病中得到充分认识，在糖尿病、心血管疾病、艾滋病、慢性炎症疾病以及癌症中都发现细胞外囊泡水平的升高，它们很有可能成为这类疾病的诊断标志物，显现了囊泡作为疾病的早期诊断、治疗干预的潜在新靶点的巨大应用前景。此外，未修饰和工程化的囊泡可能在大分子药物递送中具有应用价值。因此，对细胞外囊泡进行准确的定性和定量研究显得尤为重要。
传统的体外培养的细胞中分离和提取微囊泡的主要方法是超速离心法，这种方法缺点是耗时耗力，往往需要30-70个小时，每次最多只能处理6个样品，需要大量的起始材料，而且产量不高。
贝博? 生物自主开发的囊泡快速提取试剂盒系列产品，可以通过简单离心快速高效获得高纯度囊泡颗粒。本试剂盒提取的囊泡完好无缺，能用于各种功能研究、蛋白分析及RNA分析、电镜分析、NTA粒径分析等下游实验应用。
本试剂盒按每个样本处理4 ml细胞培养上清计，每个50 T试剂盒大约可以用于提取200 ml细胞培养上清。如果需要处理大量的细胞培养上清，将提取液按细胞培养上清体积的1：4加入细胞培养上清即可。
贝博? 还可以提供一小时快速提取获得各种样本囊泡的快速提取试剂盒（相关产品：BB-4563）。
贝博? BBcellProbe? 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。
贝博? BBcellProbe? 可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的BBcellProbe? M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
贝博? BBcellProbe? 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
贝博? BBcellProbe? 可以提供各种细胞、组织染色，免疫组织化学，细胞培养等相关试剂盒产品。
贝博? BBproExtra? 可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。
贝博? BBproExtra? 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。
贝博? BBproExtra? 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。
贝博? BBproExtra? 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒，例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。
贝博? BBproExtra? 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。
贝博? BBproExtra? 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用，则让液体保留在滤膜上，直到使用。
2.试剂拆封后请尽快使用完
有效期
一年。
适用样本
细胞培养上清
产品特点
1.使用方便，无需超速离心，省时省力；
2.纯度高，富集量大，应用范围广；
3.获取的Exosome结构和功能完整；
4.稳定性好，便于运输，便于保存。
产品应用
功能研究，核酸分析
仪器准备
1.离心机
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液HBSS
2.纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂。
2.以下以4 ml培养基为例，实际操作时按培养基和提取液A用量体积比4：1使用即可。
3.不同细胞分泌的囊泡数量差异极大，请根据实际情况选择培养基样品的量，根据下游应用和参考文献确定。条件允许的情况下采用尽可能多的细胞培养上清。
4.一般巨噬细胞、淋巴细胞、造血细胞、胰腺癌细胞等分泌囊泡较多，其它细胞样本建议每个样培养基上清用量不少于8 ml。常规的细胞样本最佳培养上清上样量为15-20 ml及以上，条件允许的情况下采用尽可能多的细胞培养上清。
5.条件允许的情况下可以将细胞培养上清浓缩后再提取囊泡。
6.在收获细胞时，应确定死亡细胞不超过5%。细胞凋亡/死亡过程中会释放大量大小不等的囊泡，它们在囊泡的提取过程中会污染活细胞产生的囊泡。
7.已经分离好的囊泡样本如果需要进行电镜观察，只能冰上或4℃保存，存放时间不超过两天，注意不可冷冻保存，否则可能会影响电镜观察效果。
使用方法
囊泡提?。?br>1. 收集4 ml待提取的培养基样品，置2-8℃保存。
2. 将样品在4℃条件下，3000×g离心15分钟。弃沉淀，收集上清。
3. 小心将上清移入另一干净离心管中。
4. 将样品在4℃条件下，10000×g离心20分钟。弃沉淀，收集上清。
5. 小心将上清移入另一干净离心管中。
6. 在4 ml上清中加入1 ml提取液A，盖紧离心管盖，上下颠倒混匀1分钟左右，使液体充分混匀。
7. 置2-8℃冰箱静置过夜。
8. 在4℃条件下，10000×g离心60分钟。
9. 小心移除上清，收集沉淀。
10. 取500 μl囊泡保存液将沉淀重悬，用移液器轻轻吹打混匀，得到囊泡沉淀重悬液，进行下列囊泡纯化步骤操作。

清洗囊泡纯化离心管：
1. 用缓冲液或纯水进行预清洗。
2. 离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用，则让液体保留在滤膜上，直到使用。

囊泡纯化：
1. 将囊泡纯化离心管内管插入所提供的一个微量离心管中。
2. 向内管中加入过500 μl的囊泡沉淀重悬液样本，并盖上盖子。
3. 将盖好盖子的囊泡纯化离心管放入离心转子中，让盖子的连接带朝着转子的中央；用一个类似的离心管平衡。
4. 以5000-8000 ×g离心约10-15分钟。离心至大约剩余50 μl-100 μl液体。
5. 离心结束后将整个离心管从离心机中取出，取出内管。
6. 为了回收纯化后的囊泡，将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中，让打开的盖子朝着转子的中央；用一个类似的离心管进行平衡。
7. 以1000×g离心2分钟，使纯化后的囊泡样本从纯化内管转移到收集管中。
8. 吸取收集管中的液体，即得到囊泡样品纯品。
9. 用纯水或缓冲液洗涤内管和收集管，继续纯化下一个样品。

囊泡纯化离心管清洗和保存：
1. 使用后用水冲洗干净；
2. 内管加入超纯水500 μl，5000 ×g离心5分钟；
3. 吸净内管中的水，加入500 μl 0.1 M NaOH，5000×g离心20分钟；
4. 用0.1 M NaOH 浸泡24小时；
5. 用水冲洗干净；
6. 用无菌水浸泡2-8℃保存。
7. 外管用自来水洗净后，用超纯水冲洗干净，晾干。
常见问题分析
1.培养细胞时，如何去除血清来源的囊泡？
多数情况下，细胞在体外培时养需要血清，而血清中一般都含有囊泡，为避免血清对细胞囊泡的污染，可采用以下方法：（1）将细胞培养用的血清通过100000×g 超速离心10小时以上以去除血清囊泡；（2）选择无血清培养基进行细胞培养。

? 无囊泡血清培养基（或者无血清培养基）在什么时候使用？
细胞在正常含血清的培养基中培养一定的时间后，细胞融合度约为60%-70%时，移去原有含血清的培养基，换成新鲜的无囊泡血清培养基（或者无血清培养基），继续培养24-48 h，细胞融合度达到80%-95%左右时收取上清,该上清液即可用于提取细胞外囊泡。

? 蛋白浓度低？
很多细胞外囊泡量不够下游应用，在条件允许的情况请尽可能加大培养上清的上样量。
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。请选择高质量的蛋白裂解液或蛋白提取试剂盒。

? 囊泡纯化管内管膜会因为离心时间过长而变干么？
不会，因为内管有死体积，总会有溶液残留在内管中。死体积大约10-20μl。

? 可以重复使用过滤管么？
可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当，可以反复使用多次。但是超过8次重复使用后过滤膜有破损风险，注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。

? 囊泡在纯化时出现了沉淀，如何改进？
如果过滤过快或者过度浓缩都有可能引起沉淀。如果样品的囊泡浓度很高，建议降低最终的囊泡浓度，保留更多的液体。
对于因过滤速度敏感而导致的沉淀，建议的改进方法是：
1）离心力降低30%-50%
2）在过滤过程中取出过滤管，用枪头反复吹吸几次。

? 有时候用囊泡纯化离心管连水都离不下来，可能是什么原因？
如果出现这种情况，可能时过滤膜的孔被堵住。请先用0.1M NaOH清洗再离心。最后用缓冲液或纯水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。

? 说明书中推荐在室温下进行离心，考虑到囊泡的稳定性，是否可以在4℃进行离心？
可以，但是低温可能会增加囊泡样品的粘性，导致流速减慢，建议可将离心时间延长。